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從全血里純化單個核細(xì)胞人、大鼠和小鼠

時間:2015年12月22日 信息來源:湘智離心機(jī) 字體: 打印此頁

儀器:離心機(jī)(低速冷凍離心機(jī),可使用24*15ml離心管,水平轉(zhuǎn)子);抽血注射器(大小與抽血體積相一致)
試劑:Optiprep;Tricine-緩沖鹽溶液(TBS,僅小鼠血)0.85%(質(zhì)量濃度)NaCl,10mmol/L Tricine-NaOH(ph = 7.4)。
 
方法:樣品收集
 
1)        收集人外周血,用EDTA(1mmol/L)或檸檬酸鹽(3.8%,質(zhì)量濃度)抗凝(為了避免對結(jié)果的影響,避免使用肝素)。
2)        用CO2麻醉大鼠,收集血液(約10ml),把血液收集到含有1ml 3.8%(質(zhì)量濃度)檸檬酸鹽的10ml注射器里。
3)        用CO2麻醉小鼠,收集血液,把血液收集到含有0.1ml 3.8%(質(zhì)量濃度)檸檬酸鹽的2ml注射器里。
 
細(xì)胞的分級分離
 
1)        取1.25ml(用于人血)或1.26ml(用于大鼠血)Optiprep與10ml的血液輕輕混血(反復(fù)顛倒)。對于小鼠血液(0.5~1.0ml),5.0ml TBS與1.5ml Optiprep混合,然后取該混合液5ml與小鼠血液混合。
2)        在頂上鋪少量生理鹽水(0.5ml),它可以防止單核細(xì)胞在空氣/介質(zhì)分界面形成區(qū)帶,也避免細(xì)胞在血漿/離心管壁交匯處堆積。
3)        在20℃、1000~1200g離心30分鐘
4)        用吸管收集彎月面的細(xì)胞,除去距沉淀2cm以上的所有上清液。
說明:大多數(shù)細(xì)胞在血漿/生理鹽水分界面處的區(qū)帶里,但10%~15%在沉淀上面的血漿里。
 
文章鏈接:中國化工儀器網(wǎng)



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