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葉綠體分離實(shí)驗(yàn)

時(shí)間:2015年12月22日 信息來源:湘智離心機(jī) 字體: 打印此頁(yè)

設(shè)備: 離心機(jī),50ml轉(zhuǎn)頭 PP 離心管,超速離心機(jī),轉(zhuǎn)頭,40ml PA管。 溶液配置: A液:0.35M Sorbitol,(山梨醇),50mM Tris桯CL (PH8.0) 5mM EDTA-Na2 B液:0.35M Sorbitol,50mM Tris桯cl (PH8.0) 25mM EDTA桸a2 C液:30%(w/w)蔗糖,50mM Tris-Hcl(PH8.0) 25mM EDTA桸a2 D液:52%(w/w)蔗糖,50mM Tris-Hcl (PH8.0) 25mM EDTA桸a2   分離步驟: 1.菠菜液40g+A液200ml,制成勻漿,過濾 2.離心機(jī)2500RPM?5分,4℃,50mlPP管,得到約10克沉淀。 3.沉淀用6.5ml B液稀釋后得到9.5-10ml原液 4. 日立超離R28S轉(zhuǎn)頭(6?0ml),40mlPA管中底部加18ml D液,中層7ml C液,上部加9.5-10ml 原液。   離心:25,000rpm,60分,4℃,加速7減速8 5.離心后,葉綠體分布在離心管中部形成葉綠體深色條帶(寬13-15mm) 6.檢視:可用光學(xué)顯微鏡(?50)可觀察到綠葉體顆粒。



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